Die Metabolomik-Analyse zeigt Veränderungen im Zusammenhang mit der Bildung von Pseudozysten, die durch Eisenmangel bei Trichomonas vaginalis hervorgerufen werden

Parasites & Vectors Band 16, Artikelnummer: 226 (2023) Diesen Artikel zitieren

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Eisen ist ein wesentliches Element für Zellfunktionen, beispielsweise den Energiestoffwechsel. Trichomonas vaginalis, ein Krankheitserreger des menschlichen Urogenitaltrakts, kann ohne ausreichende Eisenergänzung in der Umwelt überleben. Pseudozysten (zystenähnliche Strukturen) sind ein umweltverträgliches Stadium dieses Parasiten, bei dem es zu unerwünschten Erkrankungen, einschließlich Eisenmangel, kommt. Wir haben zuvor gezeigt, dass Eisenmangel eine aktivere Glykolyse, aber eine drastische Herunterregulierung der Hydrogenosomal-Energiestoffwechselenzyme induziert. Daher ist die Stoffwechselrichtung des Endprodukts der Glykolyse immer noch umstritten.

In der vorliegenden Arbeit führten wir eine LC-MS-basierte Metabolomikanalyse durch, um genaue Einblicke in die enzymatischen Ereignisse von T. vaginalis unter Eisenmangelbedingungen (ID) zu erhalten.

Zunächst zeigten wir die mögliche Verdauung von Glykogen, die Cellulosepolymerisation und die Anreicherung von Oligosacchariden der Raffinosefamilie (RFOs). Zweitens war eine mittelkettige Fettsäure (MCFA), Caprinsäure, erhöht, wohingegen die meisten nachgewiesenen C18-Fettsäuren deutlich reduziert waren. Drittens waren die Aminosäuren größtenteils reduziert, insbesondere Alanin, Glutamat und Serin. Dreiunddreißig Dipeptide zeigten eine signifikante Anreicherung in ID-Zellen, was wahrscheinlich mit der Abnahme der Aminosäuren zusammenhängt. Unsere Ergebnisse zeigten, dass Glykogen als Kohlenstoffquelle verstoffwechselt und gleichzeitig der Strukturbestandteil Cellulose synthetisiert wurde. Die Abnahme der C18-Fettsäuren deutete auf einen möglichen Einbau in das Membrankompartiment für die Bildung von Pseudozysten hin. Die Abnahme der Aminosäuren, begleitet von einem Anstieg der Dipeptide, deutete auf eine unvollständige Proteolyse hin. Diese enzymatischen Reaktionen (Alanin-Dehydrogenase, Glutamat-Dehydrogenase und Threonin-Dehydratase) waren wahrscheinlich an der Ammoniakfreisetzung beteiligt.

Diese Ergebnisse verdeutlichten die mögliche Glykogenverwertung, die Zellulosebiosynthese und den Fettsäureeinbau bei der Bildung von Pseudozysten sowie die Produktion von NO-Vorläufer-Ammoniak, die durch eisenarmen Stress induziert wird.

Trichomonas vaginalis ist der Erreger der häufigsten nichtviralen sexuell übertragbaren Krankheit, der Trichomoniasis. Es wird angenommen, dass die hohe Prävalenz der Trichomoniasis unterschätzt wird, da es viele asymptomatische Infektionen gibt. Die Symptome einer Trichomoniasis reichen von einer leichten Entzündung bis hin zu schwerwiegenden Folgen wie vorzeitigen Wehen und Fehlgeburten [1, 2]. Diese Infektion ist normalerweise selbstlimitierend; Bei Bedarf sind Tinidazol und Metronidazol die Mittel der ersten Wahl. Die zunehmende Resistenz gegen diese Medikamente veranlasst uns jedoch, neue Therapiestrategien zu entwickeln [3].

T. vaginalis kommt bei beiden Geschlechtern im Urogenitaltrakt vor, wo Nährstoffe und lebenswichtige Elemente nicht ausreichend ergänzt werden. Eisen spielt in fast allen lebenden Organismen eine wichtige biologische Rolle. Frühere Berichte zeigten, dass das Überleben von Trichomonadenzellen in Umgebungen mit Eisenmangel (ID) von unterschiedlichen Stoffwechselstrategien abhängt. Beispielsweise geht man davon aus, dass die aktivere Glykolyse den Energieerzeugungsdefekt im Hydrogenosom überwindet [4, 5]. Es ist immer noch umstritten, ob die Stoffwechselrichtung des Endprodukts der Glykolyse, Pyruvat, durch diese Bedingungen beeinflusst wird, da die nachgeschalteten Enzyme im Hydrogenosom bei Eisenmangel nahezu fehlen [4]. Pyruvat ist ein zentraler Metabolit, der zur weiteren ATP- und Fettsäurebiosynthese in Aminosäuren, Laktat und Acetyl-CoA umgewandelt werden kann [6]. Frühere Untersuchungen zeigten, dass T. vaginalis über keinen vollständigen Mechanismus verfügt, um Fettsäuren de novo zu verdauen oder zu synthetisieren [7]. Folglich wurde der Regulierung von Lipiden und verwandten Metaboliten bei diesem Protisten weniger Aufmerksamkeit geschenkt.

Zysten sind das infektiöse Stadium vieler humanpathogener Protozoen, wie z. B. Entamoeba histolytica und Giardia intestinalis. Der Stoffwechsel in zystenförmigen Zellen unterscheidet sich von dem im aktiven Trophozoiten. Während der Enzystation von E. histolytica sind der Glykogen- und der Lipidstoffwechsel aktiver für die Zystenwandbildung bzw. die Membranumlagerung [8,9,10,11]. Ähnliche Stoffwechselereignisse treten auch bei G. lamblia auf, obwohl bei E. histolytica der Hauptbestandteil der Zystenwand aus β-1,3-GalNac und nicht aus Chitin besteht [12].

Eisenmangel und andere Umwelteinflüsse wie kalte Temperaturen induzieren die morphologische Umwandlung von T. vaginalis vom Trophozoiten zur Pseudozyste (zystenähnliche Struktur) [13, 14]. Im Gegensatz zu E. histolytica und G. lamblia durchläuft T. vaginalis keinen Enzystationsprozess und weist keine Zystenwand auf. Wir wussten, dass sich Glykogen in T. vaginalis während der logarithmischen Phasen in axenischen Kulturen ansammelte und schnell verbraucht wurde [15]. Im Pseudozystenstadium wurde ein Anstieg des Chitin-/Zellulose-basierten Gehalts nachgewiesen [14]. Allerdings ist entweder die Nutzung von Glykogen oder die Chitin/Cellulose-Biosynthese, die durch Eisenmangel in T. vaginalis reguliert wird, noch weitgehend unbekannt.

T. vaginalis nutzt für seine Vermehrung einfache und komplexe Saccharide. Trussell und Johnson zeigten, dass der Protist weder Cellobiose, Saccharose noch Raffinose als Energiequelle verwendet [16]. Ein aktueller Bericht legt jedoch nahe, dass Trichomonadenzellen eine β-Fructosidase kodieren, die Saccharose und Raffinose abbauen kann [17]. Oligosaccharide der Raffinosefamilie (RFOs) kommen hauptsächlich in Pflanzen vor und werden als Speicher-/Transportzucker erzeugt. Darüber hinaus sind RFOs auch an bestimmten zellulären Prozessen beteiligt, beispielsweise an der antioxidativen Aktivität und der Signaltransduktion [18]. Dennoch wurde die Rolle von RFOs bei T. vaginalis nicht untersucht.

In dieser Studie wollten wir die durch Eisenmangel verursachten Veränderungen der Zusammensetzung der Metaboliten in T. vaginalis veranschaulichen. Mithilfe einer LC-MS-basierten Metabolomikanalyse wurden die Pyruvat-zentrierten Stoffwechselrichtungen hervorgehoben und auch Pseudozysten-assoziierte Verbindungen diskutiert. Wir fanden einen möglichen Glykogenabbau, eine Zellulosebiosynthese und eine RFO-Anreicherung in ID-Zellen. Die meisten Fettsäuren waren in den ID- und eisenreichen (IR)-Kontrollen vergleichbar, wobei ein signifikanter Anstieg der Caprinsäure zu erwarten war. C18-Fettsäuren waren größtenteils verringert, was auf ihren Einbau in membranöse Strukturen während der Pseudozystenbildung schließen lässt. Aminosäuren waren nahezu reduziert, insbesondere Alanin, Glutamat und Serin, was durch die Anhäufung von Dipeptiden erklärt werden könnte. Die enzymatischen Reaktionen in die entgegengesetzte Richtung von Alanin, Glutamat und Serin gingen mit der Freisetzung von Ammoniak einher, das ein entscheidendes Substrat für die Produktion von Stickoxid (NO) sein könnte. Insgesamt zeigte diese ungezielte Metabolomics-Analyse, dass Saccharide, Fettsäuren und Aminosäuren funktionell mit der durch Eisenmangel induzierten Pseudozystenbildung bei T. vaginalis verbunden sind. Diese Ergebnisse liefern neue Einblicke in die einzigartigen Mechanismen während einer Infektion und bieten potenzielle Angriffspunkte für weitere Untersuchungen.

Trichomonas vaginalis (ATCC_30236) wurde in YIS-Medium kultiviert, das Eisen (Eisenammoniakcitrat, 180 µM) oder den Eisenchelatbildner Dipyridyl (180 µM) als eisenreiche (IR) bzw. eisenarme (ID) Gruppe enthielt [23]. . IR-Zellen wurden gesammelt, als sie eine Dichte von ~ 2 × 106/ml erreichten, wohingegen ID-Zellen 6 Stunden nach der Behandlung mit Dipyridyl (DIP, Eisenchelatbildner) gesammelt wurden [5].

Für jede Probe wurden 1000 μl Extraktlösung (Acetonitril:Methanol:Wasser = 2:2:1) mit internem Standard (L-2-Chlorphenylalanin, 2 μg/ml) hinzugefügt. Nach 30 s Vortexen wurden die Proben 4 Minuten lang bei 30 Hz homogenisiert und 5 Minuten lang in einem Eiswasserbad beschallt. Der Homogenisierungs- und Ultraschallzyklus wurde zweimal wiederholt. Anschließend wurden die Proben 1 Stunde lang bei –40 °C inkubiert und 15 Minuten lang bei 4 °C mit 10.000 U/min zentrifugiert. Insgesamt 750 μl Überstand wurden in ein frisches Röhrchen überführt und in einem Vakuumkonzentrator bei 37 °C getrocknet. Anschließend wurden die getrockneten Proben in 200 μl 50 % Acetonitril durch 10-minütige Ultraschallbehandlung auf Eis rekonstituiert. Anschließend wurde die Konstitution 15 Minuten lang bei 4 °C und 12.000 U/min zentrifugiert und 75 μl Überstand in ein frisches 2-ml-LC-MS-Glasfläschchen überführt.

Die UHPLC-Trennung wurde mit einem UHPLC-System der Serie 1290 Infinity (Agilent Technologies) durchgeführt, das mit einer UPLC-BEH-Amid-Säule (2,1 × 100 mm, 1,7 μm, Waters) ausgestattet war. Die mobile Phase bestand aus 25 mmol/l Ammoniumacetat und 25 mmol/l Ammoniakhydroxid in Wasser (pH = 9,75) (A) und Acetonitril (B). Die Analyse wurde mit einem Elutionsgradienten wie folgt durchgeführt: 0–0,5 min, 95 % B; 0,5–7,0 Min., 95–65 % B; 7,0–8,0 Min., 65–40 % B; 8,0–9,0 Min., 40 % B; 9,0–9,1 Min., 40–95 % B; 9,1–12,0 min, 95 % B. Die Säulentemperatur betrug 25 °C. Die Temperatur des Autosamplers betrug 4 °C und das Injektionsvolumen betrug 1 μl (pos) oder 1 μl (neg).

Die TripleTOF 6600-Massenspektrometrie (AB Sciex) wurde verwendet, um während eines LC-MS-Experiments MS/MS-Spektren auf informationsabhängiger Basis (IDA) zu erfassen. In diesem Modus wertete die Erfassungssoftware (Analyst TF 1.7, AB Sciex) während der Erfassung kontinuierlich die MS-Daten der vollständigen Scan-Umfrage aus und löste die Erfassung von MS/MS-Spektren abhängig von vorab ausgewählten Kriterien aus. In jedem Zyklus die 12 intensivsten Vorläuferionen mit Intensitäten. 100 wurden für MS/MS bei einer Kollisionsenergie (CE) von 30 eV ausgewählt. Die Zykluszeit betrug 0,56 s. Die ESI-Quellenbedingungen wurden wie folgt eingestellt: Gas 1, 60 psi; Gas 2, 60 psi; Vorhanggas, 35 psi; Quellentemperatur, 600 °C; Declustering-Potenzial, 60 V; Ionensprühspannung schwebend (ISVF), 5000 V und – 4000 V im positiven bzw. negativen Modus [19].

In den vorherigen Schritten generierte MS-Rohdatendateien (.wiff) wurden von ProteoWizard in das mzXML-Format konvertiert und vom R-Paket XCMS (Version 3.2) verarbeitet. Der Prozess umfasste Peak-Entfaltung, Ausrichtung und Integration. Minfrac und Cutoff wurden auf 0,5 bzw. 0,6 festgelegt. Zur Metabolitenidentifizierung wurde eine firmeneigene MS2-Datenbank verwendet [20].

Die Reproduktivitäten von zwei Metabolomics-Sets wurden durch orthogonale partielle Diskriminanzanalyse der kleinsten Quadrate (OPLS-DA) analysiert. Der Student-T-Test und die Variablenbedeutung in der Projektion (VIP) wurden durchgeführt, um signifikante Veränderungen bei Metaboliten hervorzuheben. Sternchen wurden verwendet, um die Signifikanz jedes Tests darzustellen, die durch den P-Wert bestimmt wurde (*P < 0,05; **P < 0,01; ***P < 0,001).

Für die HPLC-QTOF-MS-Analyse wurden vier gleiche Proben von IR- und ID-Trichomonadenzellen gesammelt. Im Allgemeinen wurde eine Hauptkomponentenanalyse (PCA) durchgeführt, um die Korrelation des Metabolomics-Datensatzes zwischen den Versuchsgruppen zu zeigen. Aufgrund der geringen Probengröße und der vielfältigen Dimensionen der nachgewiesenen Metaboliten war PCA jedoch für unser Experiment nicht geeignet (Daten nicht gezeigt). OPLS-DA ist eine weitere Methode zur Messung der Ähnlichkeiten und Unterschiede zwischen experimentellen Einstellungen (IR und ID). Das Score-Plot von OPLS-DA zeigte eine Korrelation zwischen IR- und ID-Datensätzen im positiven und negativen Ionenmodus (Abb. 1a, b). Darüber hinaus wurden Permutationstests (n = 999) für jeden Ionenmodus durchgeführt, um die Gültigkeit der beiden Versuchsgruppen weiter zu bestätigen (Abb. 1c, d). Die R2Y- und Q2-Werte waren > 0,5, was darauf hindeutet, dass diese Clusterbildungstrends der aus den Proben stammenden Hauptkomponenten erwartungsgemäß sowohl im positiven als auch im negativen Ionenmodus getrennt waren.

Multivariate Analyse der UHPLC-MS-Daten von eisenreichen (rot) und eisenarmen (blau) Gruppen. OPLS-DA-Score-Plots (a, b) und Permutationsanalyse (c, d) (Permutationstest n = 999) positiver und negativer Ionenmodi

Insgesamt waren 3277 Peaks im positiven und negativen Ionenmodus vorhanden (1802 bzw. 1475) (Tabelle 1). Darunter wurden 824 Metaboliten nach MS/MS-Analyse mit Anmerkungen versehen (~ 25 % der Gesamtverbindungen). Die Annotationsrate der menschlichen Metabolomics-Analyse beträgt etwa 10 % [21, 22], was darauf hindeutet, dass unsere Annotationsrate angemessen und für weitere Untersuchungen geeignet war. Die kommentierten Verbindungen sind in der Zusatzdatei 1 aufgeführt.

Es gab 667 Verbindungen, die aus positiven und negativen Ionenmodi stammten und gemäß den Vulkandiagrammen und VIP-Werten signifikante Veränderungen zwischen den IR- und ID-Gruppen aufwiesen (Abb. 2). Blaue Punkte stellen die hochregulierten Verbindungen dar, während rote Punkte die herunterregulierten Verbindungen in IR-Zellen im Vergleich zu ID-Zellen anzeigen. Die Größe der Punkte gibt die VIP-Punktzahl an.

Vulkandiagramme deutlich veränderter Verbindungen in positiven (a) und negativen (b) Ionenmodellen. Rote Punkte stellen Verbindungen dar, die in IR-Zellen deutlich hochreguliert sind. Blaue Punkte stellen Verbindungen dar, die in IR-Zellen deutlich herunterreguliert sind. VIP-Score-Werte werden durch die Größe der Punkte angezeigt. IR, eisenreich; Ausweis, Eisenmangel

Unser vorheriger Bericht legte nahe, dass die Glykolyse bei ID T. vaginalis sehr aktiv ist [23]. Aufgrund der globalen Herunterregulierung von Genen/Proteinen in Hydrogenosomen unter ID-Bedingungen würde Pyruvat jedoch nicht in Acetyl-CoA für die ATP- und Fettsäureproduktion umgewandelt werden [4, 5]. Um das Schicksal von Pyruvat bei Eisenmangel besser zu verstehen, haben wir uns in dieser Studie auf Pyruvat-verwandte Verbindungen konzentriert.

Die erste Gruppe von Verbindungen, auf die wir uns konzentrierten, waren Oligosaccharide, da sie in ID-Zellen erheblich verändert wurden. Abbildung 3 zeigt die am meisten akkumulierten Oligosaccharide in ID-Zellen im Vergleich zu denen der IR-Kontrolle.

Oligosaccharidstoffwechsel in Trichomonas vaginalis, kultiviert unter verschiedenen Eisenkonzentrationen. Die bei dieser Analyse ermittelten Oligosaccharidmengen werden in Balkendiagrammen angezeigt. Signifikant regulierte Verbindungen werden in Rot dargestellt (P < 0,05). Die entsprechenden Enzyme sind durch die Pfeile aufgelistet und die relativen RNA-Expressionsniveaus (ID/IR) sind angegeben. In ID-Zellen hochregulierte Gene sind rot dargestellt, während in ID-Zellen herunterregulierte Gene grün dargestellt sind [5]. Die dargestellten grauen Verbindungen waren in dieser Analyse nicht nachweisbar. Galactinol-Synthase fehlt in T. vaginalis

Der linke Teil von Abb. 3 zeigt, dass Isomaltose, Maltotriose und Maltopentaose mit Ausnahme von Maltose signifikant anstiegen. Diese Di-, Tri- und Pentasaccharide wurden entweder durch Glukosepolymerisation oder durch Glykogenabbau erzeugt. Die Expression der mit diesen Reaktionen verbundenen Enzyme Isomaltase und ɑ-Glucosidasen war in ID-Zellen erhöht (Abb. 3). Die Expression einer Glykogenphosphorylase (TVAG_348330) war leicht hochreguliert, wohingegen die Glykogensynthase unter eisenlimitierten Bedingungen herunterreguliert war (Abb. 3). Basierend auf den Expressionsprofilen der Enzyme des Glykogenstoffwechsels vermuteten wir, dass die Richtung des Glykogen- und Oligosaccharidstoffwechsels in Richtung Abbau geht.

Glykogen ist ein Speichersaccharid, von dem berichtet wird, dass es sich in der logarithmischen Phase von axenisch kultivierten T. vaginalis ansammelt und schnell verbraucht wird. Die Aktivität der Glykogenphosphorylase zeigte den gleichen Trend wie der Glykogenspiegel in der vorherigen Messung [15]. Der Glykogenverbrauch zusammen mit einer aktiveren Glykolyse während des Enzystationsprozesses wurde bei E. histolytica und G. lamblia nachgewiesen [24,25,26]. Im Fall von Eisenmangel deutete der Übergang zu Pseudozysten und einer aktiveren Glykolyse darauf hin, dass T. vaginalis ein zystationsähnliches Ereignis durchlief, das den intestinalen Protozoen ähnelte. Die mögliche Nutzung von Glykogen dient nicht nur dem Energiestoffwechsel, sondern stellt auch ein Substrat für die Zystenwandsynthese bereit, beispielsweise Chitin [25]. Bei der Pseudozyste von T. vaginalis fehlt die echte Zystenwand; es wäre jedoch eine katalytische Richtung von Glucose zu Cellulose. Dies wird im folgenden Abschnitt besprochen.

Ein weiteres Disaccharid wurde aufgrund der drastischen Erhöhung der ID-Zellen, Cellobiose, im Vergleich zur IR-Kontrolle hervorgehoben (Abb. 3). Cellobiose ist der Baustein von Cellulose, einem Strukturpolymer für Pflanzen und Zysten [12]. Das für die Umwandlung zwischen NDP-Glucose und Cellobiose verantwortliche Enzym, β-Glucosidase, wurde in ID-Zellen herunterreguliert. Umgekehrt wurde in ID-Zellen eine Hochregulierung von Cellulase (TVAG_194310) festgestellt, die Cellulose in Cellobiose umwandelt. Cellulase katalysiert insbesondere bidirektionale Reaktionen, die auch für die Cellulosebiosynthese verantwortlich sind [27]. Die Beweise könnten darauf hindeuten, dass Cellulase eher an der Cellulosebiosynthese als am Abbau zu Cellobiose beteiligt ist.

Die gegenseitige Umwandlung von Cellobiose und polymerer Cellulose ist funktionell mit der Zellstruktur verbunden. Frühere Untersuchungen haben gezeigt, dass Polysaccharide, darunter Chitin, säurefeste Lipide und Cellulose, das Hauptgerüst für die Zystenwandbildung in bestimmten zystischen Protozoen sind [12]. Pseudozysten von T. vaginalis sind mit einer Chitin-/Zellulose-basierten Architektur aufgebaut [14]. Obwohl es vier Chitinase-Gene gibt, die von T. vaginalis kodiert werden, wurde keines davon untersucht. Basierend auf unserem RNA-Expressionsdatensatz wurden alle Chitinasen zwischen IR- und ID-Bedingungen nicht signifikant verändert [5]. Wir haben zunächst das Vorhandensein von Cellobiose nachgewiesen, einem Disaccharid mit einer β-1,4-glykosidischen Bindung von Glucose, das auch das Substrat für die Cellulosebiosynthese ist. Die Akkumulation von Cellobiose ging mit einer Herunterregulierung der β-Glycosidase und einer Hochregulierung der Cellulase in ID-Zellen einher. Darüber hinaus wird Cellobiose nicht für die Proliferation von Trichomonadenzellen verwendet [16]. Gemeinsam haben wir vermutet, dass die Zellulosebiosynthese an der Progression von ID-Zellen während der Pseudozystenbildung beteiligt sein könnte.

Wir haben oben festgestellt, dass die Glykogenspeicherung und der strukturelle Zellulosestoffwechsel durch Eisenmangel beeinflusst werden. Überraschenderweise zeigte unser Datensatz, dass sich Oligosaccharide (RFOs) der Raffinosefamilie, einschließlich Saccharose, Raffinose und Stachyose, auch unter ID-Bedingungen signifikant anreicherten (Abb. 3). RFOs sind Saccharide, die aus Fructose, Glucose und Galactose bestehen. Im Syntheseweg wird Galactinol zunächst durch Galactinol-Synthase aus UDP-Galactose und Myo-Inositol erzeugt. Galactinol und Saccharose sind Substrate für die durch ɑ-Galactosidase katalysierte Raffinosesynthese. Anschließend wird durch die Kombination von Raffinose und Galactinol Stachyose erzeugt [28]. Die Konzentrationen von Myoinositol und Galactinol waren in ID-Zellen dramatisch erhöht (Abb. 3, unten rechts). Die RNA-Spiegel der mit der RFO-Synthese verbundenen Enzyme β-Fructosidase (TVAG_254130) und ɑ-Galactosidase (TVAG_145340) waren in ID-Zellen ebenfalls hochreguliert. Obwohl UDP-Galactose nicht nachgewiesen wurde und Galactinol-Synthase in T. vaginalis fehlte, führten offensichtliche Erhöhungen von Galactinol und den nachgeschalteten RFOs zu der Hypothese, dass Trichomonadenzellen verschiedene Formen von Zucker produzierten, um auf ungünstige Umgebungen zu reagieren.

RFOs sind im Pflanzenreich weit verbreitet und besonders gut in Sojabohnen und Kichererbsen untersucht [18]. Diese Oligosaccharide sind an mehreren biologischen Funktionen beteiligt, beispielsweise an der Speicherung und dem Transport von Kohlenstoff, der Toleranz gegenüber Umweltbelastungen und der Manipulation des menschlichen Darmmikrobioms [18]. Eine frühere Untersuchung zeigte, dass rekombinante Trichomonaden-β-Fructosidase in der Lage ist, Saccharose und Raffinose abzubauen [17]. Als Speicherzucker wird Raffinose jedoch nicht für das Wachstum von T. vaginalis genutzt [29]. Diese Aussagen legen nahe, dass Raffinose, Saccharose und Stachyose wahrscheinlich nicht zur Energieerzeugung und Zellproliferation verwendet werden.

RFOs reichern sich unter eisenarmen Bedingungen an und wirken in Pflanzen als auf Stress reagierende Moleküle [30, 31]. Die Funktion akkumulierter RFOs spiegelt die Beteiligung von Umweltveränderungen bei Änderungen der Osmolarität, Temperatur und Infektionen wider [32]. Darüber hinaus besitzen RFOs eine Hydroxylradikalfängeraktivität, die ein wichtiges Antioxidans wäre [33]. Wir vermuteten, dass sich in ID-Trichomonadenzellen reaktive Stickstoffspezies (RNS) und nicht reaktive Sauerstoffspezies (ROS) ansammelten. Das Ungleichgewicht der Redoxhomöostase bei Eisenmangel induziert das Thioredoxin-Peroxiredoxin-System in T. vaginalis [5]. Dementsprechend spekulierten wir, dass der Anstieg der RFOs auch ein durch Eisenmangel verursachtes Antioxidans sein könnte.

Gemeinsam stellten wir die Hypothese auf, dass Glykogen als Ressource für eine aktivere Glykolyse genutzt wurde; Andererseits fand gleichzeitig die Cellulosebiosynthese mit der Bildung von Pseudozysten statt. Die Akkumulation von RFO ergab eine mögliche antioxidative oder signalisierende Rolle als Reaktion auf Eisenmangel, die in Zukunft im Detail untersucht werden sollte.

Frühere Studien haben gezeigt, dass T. vaginalis über eine fehlerhafte Maschinerie zur Synthese lipidbezogener Biomoleküle wie Fettsäuren verfügt [7]. Der Genomentwurf zeigte auch, dass der Protist keine Gene für die vollständige Betaoxidation oder Biosynthese von Fettsäuren kodiert [34]. Allerdings haben wir in der Metabolomics-Analyse verschiedene Arten von Lipiden identifiziert.

Abbildung 4 zeigt, dass der Gehalt an ungesättigten Fettsäuren größtenteils vergleichbar war, mit Ausnahme einer signifikanten Verringerung des Gehalts an Linolsäure (C18), Gamma-Linolensäure (C18) und Erucasäure (C22) in ID-Zellen. Darüber hinaus wurde in der Kategorie der gesättigten Fettsäuren ein drastischer Rückgang des Stearinsäuregehalts (C18) in ID-Zellen gezeigt. Diese Ergebnisse deuten auf eine stärkere Nutzung oder geringere Synthese mehrerer C18-Fettsäuren in ID-Trichomonadenzellen hin.

In der Metabolomics-Analyse ermittelte Gehalte an ungesättigten (a) und gesättigten (b) Fettsäuren. Die relativen Werte der identifizierten Fettsäuren werden als fache Änderung von ID-Zellen (offener Balken) zu IR-Zellen (geschlossener Balken) (ID/IR) angezeigt. Die Signifikanz wird durch Sternchen angezeigt: *P < 0,05; **P < 0,01; ***P < 0,001. IR, eisenreich; Ausweis, Eisenmangel

Veränderungen im Lipidstoffwechsel könnten an den morphologischen Veränderungen humanpathogener Protozoen beteiligt sein, beispielsweise an der Enzystation. In G. lamblia wurde die Zusammensetzung der Fettsäuren untersucht und es wurde festgestellt, dass Stearinsäure (C18) und Ölsäure (C18) während der Enzystation die am häufigsten vorkommenden Fettsäuren in Giardia sind [35]. Trichomonas vaginalis durchlief unter eisenlimitierten Bedingungen eine Umwandlung von beweglichen Trophozoiten in arretierte Pseudozysten [13]. Die Zusammensetzung der Fettsäuren in ID-Trichomonadenzellen (oder Pseudozysten) zeigte einen globalen Rückgang der C18-Fettsäuren (Abb. 4). Der Unterschied zwischen früheren und aktuellen Studien besteht im Stadium der Protisten: zystische G. lamblia und Pseudozysten von T. vaginalis. Darüber hinaus reguliert die Lipidzusammensetzung den Enzystationsprozess von E. histolytica [11, 36]. Daher stellten wir die Hypothese auf, dass diese C18-Fettsäuren wahrscheinlich während des Fortschreitens der Enzystation in Membranstrukturen eingebaut wurden.

Obwohl die Transacylierungsaktivität an der Bildung mehrerer Lipide beteiligt ist, haben frühere Studien gezeigt, dass T. vaginalis nicht in der Lage ist, Fettsäuren zu synthetisieren [37]. Allerdings werden mittelkettige Fettsäuren [hauptsächlich mittelkettige Fettsäuren (MCFAs)] in Phosphoglyceride und Sphingolipide eingebaut [7]. Tatsächlich waren die in unseren Ergebnissen nachweisbaren Phospholipide deutlich reduziert, insbesondere Derivate von Phosphoethanolamiden (PEs) (Zusatzdatei 2). Derivate von Phosphatidylcholin, Cholin und Serin wurden in der Metabolomics-Analyse nicht signifikant verändert (Daten nicht gezeigt). Die Verringerung der nachgewiesenen Fettsäuren und Phospholipide wurde wahrscheinlich in die Membranstruktur von T. vaginalis eingebaut. Insgesamt deuten diese Ergebnisse darauf hin, dass Eisenmangel die meisten nachgewiesenen C18-Fettsäuren über den mutmaßlichen Fettsäureeinbau in Phospholipide senkte, was möglicherweise mit der Pseudozystenbildung bei T. vaginalis verbunden ist.

Aufgrund des Fehlens verwandter Enzyme in T. vaginalis war die Zusammensetzung der Fettsäuren bisher nicht im Detail dokumentiert. Ein als 2-Nitropropan-Dioxygenase-Vorläufer bezeichnetes Gen (TVAG_479680), auch bekannt als Enoyl-Acyl-Carrier-Protein-Reduktase (ENR), ist an der Fettsäurebiosynthese beteiligt [38]. ENR katalysiert den letzten Schritt der Fettsäureverlängerung der Typ-II-Fettsäuresynthese (FAS II). Die Expression von TvENR zeigte unter ID-Bedingungen einen signifikanten Anstieg [5]. Hier haben wir gezeigt, dass eine mutmaßliche ENR-abhängige synthetisierte Caprinsäure unter ID-Bedingungen erhöht war, während die meisten davon mit Ausnahme von Stearinsäure (siehe oben) vergleichbar waren (Abb. 4b). Dieses Ergebnis legt nahe, dass in T. vaginalis ein funktionelles FAS II vorhanden wäre und die nachgeschaltete Fettsäure durch Eisenmangel verändert werden könnte.

Acetyl-CoA ist der essentielle Baustein von Fettsäuren, von dem angenommen wurde, dass er in ID-Zellen reduziert ist, da das Enzym Pyruvat:Ferredoxin-Oxidoreduktasen (PFOs) in ID-Zellen drastisch abnahm [5, 34]. Wir vermuten, dass die Akkumulation von Caprinsäure Acetyl-CoA nutzen könnte, das weder aus Glucose noch den übrigen bekannten Substraten stammt oder durch den Abbau längerer Fettsäuren wie Stearinsäure (C18) entsteht [37]. Dennoch konnte nicht ausgeschlossen werden, ob der Transport von Fettsäuren aus dem Kulturmedium durch eine Eisenlimitierung induziert wurde.

Lipide sind eine wichtige Energiequelle, insbesondere bei begrenzter Zuckerergänzung. Frühere Untersuchungen ergaben, dass bei T. vaginalis keine enzymatischen Aktivitäten im Zusammenhang mit der β-Oxidation vorliegen [37]. Hier haben wir gezeigt, dass mindestens drei ungesättigte Fettsäuren in ID-Zellen signifikant reduziert waren (Abb. 4). Die mRNA-Expression der langkettigen Fettsäure-Acyl-CoA-Synthetase, dem ersten enzymatischen Schritt bei der Oxidation von Fettsäuren, nahm leicht zu, was weiter auf die Verwendung von Fettsäuren durch T. vaginalis hindeutet [5]. Diese Hypothese sollte jedoch in Zukunft überprüft werden.

Die einzige in dieser Studie identifizierte angesammelte Fettsäure ist Caprinsäure (bekannt als Decansäure), eine MCFA. MCFAs (bestehend aus 7–12 Kohlenstoffatomen) haben wichtige biologische Funktionen in Zellen [39]. Frühere Berichte zeigten, dass MCFAs entscheidende Energiespeichermoleküle sind. Die relativ kurze Kohlenstoffkette ist für den Transport in die Mitochondrien von Vorteil und lässt sich daher leichter katalysieren [40]. Darüber hinaus werden bei der β-Oxidation von MCFAs weniger ROS erzeugt als bei langkettigen Fettsäuren [41]. Neben der Energieproduktion wurden auch regulatorische Rollen von MCFAs entdeckt, beispielsweise die Verbesserung der Glykolyse im Gehirn [42]. Dieses Phänomen spiegelt die Tatsache wider, dass die Glykolyse bei T. vaginalis bei Eisenmangel aktiver ist [23]. Die Gluconeogenese wird auch durch MCFAs gefördert. Die Schlüsselenzyme fehlen jedoch in T. vaginalis [34, 43]. Daher könnte die Akkumulation von Caprinsäure mit der Stoffwechselregulation von T. vaginalis bei Eisenmangel zusammenhängen.

Insgesamt deuten unsere Ergebnisse darauf hin, dass die Verwendung von C18-Fettsäuren eine Reaktion auf die Transformation von Pseudozysten war. Der Energiestoffwechsel, wie Glykolyse und Fettsäurekatalyse, wurde durch Eisenmangel verändert, der möglicherweise durch die erhebliche Anreicherung von Caprinsäure reguliert wurde.

Der Abbau vieler Aminosäuren beruht auf der Anwesenheit von Pyruvat. Wir konnten eine aktivere Proteolyse über das Ubiquitin-Proteasom-System (UPS) nachweisen, die durch Eisenmangel ausgelöst wird [5]. Darüber hinaus wurden in ID-Zellen mehrere proteolytische Enzyme hochreguliert. Die Proteolyse ist für die Clearance und das Recycling von Aminosäuren verantwortlich. Wir gingen daher davon aus, dass sich Aminosäuren unter eisenlimitierten Bedingungen in Trichomonadenzellen ansammeln würden. Der Datensatz zeigte jedoch einen Rückgang der Aminosäurespiegel in ID-Zellen.

Von den nachgewiesenen Aminosäuren waren in ID-Zellen nur Alanin, Glutamat und Serin signifikant reduziert (Abb. 5a). Alanin-Dehydrogenase und Threonin-Dehydratase katalysieren die Umwandlung von Alanin bzw. Serin in Pyruvat. Darüber hinaus ist die Glutamatdehydrogenase für die Umwandlung zwischen Glutamat und ɑ-Ketoglutarat verantwortlich (Abb. 5b–d). Auffällig ist, dass alle diese Reaktionen mit der Freisetzung von Ammoniak einhergingen. Andere mit der Ammoniakfreisetzung verbundene Aminosäurekatabolismen, einschließlich Arginin, Asparagin, Cystein, Glutamin, Methionin, Threonin und Tryptophan, waren im Vergleich zur IR-Kontrolle alle reduziert, wenn auch ohne Bedeutung (Abb. 5a). Daher wurden diese Aminosäuren mit einem ähnlichen Hochregulierungstrend reduziert wie die entsprechenden Enzyme in ID-Zellen, was darauf hindeutet, dass diese Reaktionen in der entgegengesetzten Richtung katalysiert wurden, in der Ammoniak erzeugt wurde.

Aminosäurezusammensetzung in T. vaginalis, kultiviert in verschiedenen Eisenkonzentrationen. Die im IR (geschlossene Balken) und ID (offene Balken) nachgewiesenen Aminosäuren sind dargestellt (a). Die Signifikanz wird durch Sternchen angezeigt: *P < 0,05; **P < 0,01; ***P < 0,001. b–d Es werden Reaktionen von Alanin-Dehydrogenase, Glutamat-Dehydrogenase und Threonin-Dehydratase gezeigt. Die relativen RNA-Expressionsniveaus (ID/IR) von Genen werden in den Farben Rot (hochreguliert in ID) und Grün (herunterreguliert in ID) angezeigt [5]. IR, eisenreich; Ausweis, Eisenmangel

Glutamat ist das Stoffwechselzentrum für mehrere Aminosäuren [34]. Leucin und Lysin zeigten in ID-Zellen unveränderte oder leicht erhöhte Werte. Das Enzym katalysiert die Umwandlung von Glutamat in Isoleucin, Leucin und Valin, Aminotransferasen für verzweigtkettige Aminosäuren (BCAA) (TVAG_026740), die unter ID-Bedingungen hochreguliert werden, während Lysin-Aminotransferase auf RNA-Ebene nicht nachweisbar ist [5]. Der leichte Anstieg von Leucin und Lysin deutete darauf hin, dass die katalytische Richtung von Glutamat nicht nur in Richtung ɑ-Ketoglutarat, sondern auch in Richtung Leucin und Lysin gerichtet war (Abb. 5a).

Stickstoffmonoxid (NO) spielt eine entscheidende Überlebensrolle in ID-Trichomonadenzellen; Allerdings machte die Arginin-abhängige NO-Erzeugung nur etwa 20 % des gesamten NO aus, was darauf hindeutet, dass das meiste NO über verschiedene unbekannte Mechanismen synthetisiert wurde [5]. Ammoniak ist eine stickstoffhaltige Verbindung, die durch Oxidation in NO umgewandelt werden kann [44, 45]. Der Ammoniakstoffwechsel erfolgt im Hydrogenosom von T. vaginalis durch die Aktivität der Hydroxylaminreduktase (HCP, TVAG_336320), die in ID-Zellen stark exprimiert wird [46]. Darüber hinaus ist bekannt, dass HCP im Bakterienmodell NO abfängt, was auf einen möglichen Zusammenhang zwischen Ammoniak und dem NO-Metabolismus in T. vaginalis hinweist [47]. Daher stellten wir die Hypothese auf, dass Ammoniak, das aus dem Aminosäurekatabolismus stammt, ein wichtiges Substrat für die NO-Produktion in T. vaginalis unter eisenarmen Bedingungen sein könnte.

Die meisten in ID-Zellen reduzierten Aminosäuren wurden oben diskutiert; Es ist jedoch nicht klar, ob andere Mechanismen als der Aminosäurekatabolismus beteiligt sind. Ein Teil der Dipeptide besetzte die annotierten Verbindungen des Datensatzes und erregte unsere Aufmerksamkeit. Dipeptide bestehen aus zwei durch Peptidbindungen verknüpften Aminosäuren und werden entweder proteolytisch oder proteinogen erzeugt [48, 49]. Theoretisch gibt es 400 mögliche Kombinationen von Dipeptiden. In der vorliegenden Untersuchung haben wir 170 Dipeptide identifiziert (Abb. 6). Davon akkumulierten 33 in ID-Zellen, während 9 in IR-Zellen erhöht waren. Dieses Ergebnis könnte teilweise eine Erklärung dafür sein, dass die allgemeine Verringerung des Aminosäurespiegels in ID-Zellen durch die Ansammlung von Dipeptiden verursacht wird. Dipeptide mit N-terminalem Prolin, Valin und Phenylalanin kamen in ID-Zellen am häufigsten vor. Tatsächlich war die Expression von Dipeptidasen und Dipeptidylpeptidasen in ID-Zellen größtenteils hochreguliert; Daher konnte der Synthesemechanismus von Dipeptiden nicht bestimmt werden [5].

Veränderungen der Dipeptidmengen in T. vaginalis, kultiviert in unterschiedlichen Eisenkonzentrationen. Die relativen Konzentrationen der identifizierten Dipeptide sind in dieser Tabelle aufgeführt. Insgesamt wurden in dieser Arbeit 170 Dipeptide identifiziert. Dipeptide ohne signifikante Unterschiede sind mit ◎ gekennzeichnet. In IR-Zellen akkumulierte Dipeptide sind mit einem schwarz gefüllten Quadrat markiert, während in ID-Zellen akkumulierte Dipeptide mit einem schwarz gefüllten Kreis markiert sind (P < 0,05)

Dipeptide, die aus Cysteinresten bestehen, werden mit einer antioxidativen Aktivität in Verbindung gebracht [50]. Aufgrund des durch Eisenmangel verursachten Redoxungleichgewichts wurden jedoch die einzigen identifizierten Cystein-haltigen Dipeptide, Ile-Cys und Lys-Cys, durch den Eisengehalt in T. vaginalis nicht verändert. Dipeptide spielen auch regulatorische Rollen. Das glykolytische Enzym Glycerinaldehyd-3-phosphat-Dehydrogenase (GAPDH) ist das Ziel des Tyr-Asp-Dipeptids. Die Interaktion zwischen GAPDH und Tyr-Asp führt zu einer Einschränkung der enzymatischen Aktivität [51]. Dies deutet darauf hin, dass diese stressspezifisch akkumulierten Dipeptide an der biologischen Regulation in T. vaginalis beteiligt sein könnten.

Zusammenfassend lässt sich sagen, dass die allgemeine Verringerung der Aminosäurespiegel in ID-Zellen möglicherweise mit der Akkumulation von Dipeptiden verbunden ist. Darüber hinaus gingen deutlich reduzierte Alanin-, Glutamat- und Serinwerte mit der Freisetzung von Ammoniak einher, das wahrscheinlich das Substrat für die NO-Produktion im Protisten unter Eisenmangelumgebungen war.

In dieser Studie führten wir eine ungezielte Metabolomics-Analyse durch, um die Stoffwechselrichtungen von Glukose und Pyruvat zu veranschaulichen. Wir fanden heraus, dass ein möglicher Glykogenabbau, eine Cellulosepolymerisation und eine RFO-Synthese gleichzeitig stattfanden, was zu einer aktiveren Glykolyse, Pseudozystenbildung bzw. Antioxidation führte. Caprinsäure war die einzige Fettsäure, die sich in ID-Trichomonadenzellen anreicherte, während die meisten C18-Fettsäuren deutlich reduziert waren. Dies könnte auf Veränderungen der Membranstruktur während der Pseudozystenbildung zurückzuführen sein. Schließlich wurde die allgemeine Verringerung des Aminosäurespiegels wahrscheinlich durch die Akkumulation von Dipeptiden verursacht. Die Ammoniakfreisetzung aus Reaktionen des Alanin-, Glutamat- und Serinkatabolismus war das mögliche Substrat für die NO-Produktion in T. vaginalis bei Eisenmangel. Diese Ergebnisse liefern Informationen über metabolische Veränderungen, die hauptsächlich zur Bildung von Pseudozysten führen, die durch Eisenmangel hervorgerufen werden. Ein vorgeschlagenes Modell ist in Abb. 7 dargestellt.

Das vorgeschlagene Modell der Stoffwechselveränderungen in T. vaginalis in eisenarmen Umgebungen. Sobald die Trichomonadenzellen unter Eisenmangel litten, verwandelten sich die meisten Zellen in Pseudozysten. Die Kohlenstoffquelle der aktiveren Glykolyse stammt aus der Glykogenhydrolyse, da sich ɑ-1,4-verknüpfte Oligosaccharide aus Glucose ansammeln. Die Akkumulation von Cellobiose war ein möglicher Hinweis auf die Cellulosebiosynthese, die den entscheidenden Konformationsbestandteil von Pseudozysten darstellt. Die Reduzierung der C18-Fettsäuren implizierte den Einbau in Phospholipide zur Bildung von Pseudozysten. Die Akkumulation von Caprinsäure könnte an der Regulierung der Glykolyse oder als Signalmolekül als Reaktion auf eisenarme Umgebungen beteiligt sein. Die Aminosäurereduktion resultierte wahrscheinlich aus der Akkumulation von Dipeptiden oder einer unvollständigen Proteolyse. Darüber hinaus waren die signifikanten Reduzierungen von Alanin, Glutamat und Serin alle an der Freisetzung von Ammoniak beteiligt, das wahrscheinlich eine Schlüsselressource für die Stickoxidsynthese in T. vaginalis war. Rot und grün markierte Verbindungen repräsentieren die Akkumulation bzw. Reduktion in ID-Zellen. Grau gefärbte Metaboliten waren die mutmaßlichen Metaboliten, die mit den nachgewiesenen Verbindungen in Zusammenhang standen. Die mutmaßlichen molekularen Funktionen oder Wege wurden in blauer Farbe markiert

Alle während dieser Studie generierten oder analysierten Daten sind in diesem veröffentlichten Artikel (und seinen Zusatzdateien 1 und 2) enthalten.

Eisenmangel

Eisenreich

Oligosaccharide der Raffinosefamilie

Mittelkettige Fettsäure

Stickoxid

Orthogonale partielle Diskriminanzanalyse der kleinsten Quadrate

Variable Bedeutung in der Projektion

Hauptkomponentenanalyse

Hochleistungs-Flüssigkeitschromatographie-Quadrupol-Flugzeit

Reaktive Stickstoffspezies

Reaktive Sauerstoffspezies

Phosphoethanolamide

Enoyl-Acyl-Trägerprotein-Reduktase

Fettsäuresynthese vom Typ II

Pyruvat:Ferredoxin-Oxidoreduktase

Ubiquitin-Proteasom-System

Verzweigtkettige Aminosäure

Hydroxylaminreduktase

Glycerinaldehyd-3-phosphat-Dehydrogenase

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Wir danken BioTools (Taiwan) für die Unterstützung bei der Metabolomics-Analyse in dieser Studie.

Diese Arbeit wurde vom National Science and Technology Council, Taiwan (NSTC 111-2320-B-006-068 an WHC und NSTC 110-2320-B-182-016-MY3 an PT) und Chang Gung Memorial Hospital Research Funding unterstützt ( CMRPD1K0471/CMRPD1K0472 an PT).

Abteilung für Mikrobiologie und Immunologie, Medizinische Fakultät, Nationale Cheng-Kung-Universität, Tainan, Taiwan

Wei-Hung Cheng

Abteilung für Parasitologie, Medizinische Fakultät, Nationale Cheng-Kung-Universität, Tainan, Taiwan

Wei-Hung Cheng

Abteilung für Biomedizinische Wissenschaften, College of Medicine, Chang Gung University, Dist. Guishan, Stadt Taoyuan, Taiwan

Po-Jung Huang

Kernlabor für Genommedizin, Chang Gung Memorial Hospital, Linkou, Taiwan

Po-Jung Huang, Chi-Ching Lee und Yuan-Ming Yeh

Abteilung für Informatik und Informationstechnik, College of Engineering, Chang Gung University, Guishan Dist., Stadt Taoyuan, Taiwan

Chi-Ching Lee

Graduate Institute of Health Industry Technology, Chang Gung University of Science and Technology, Taoyuan, Taiwan

Yuan-Ming Yeh

Graduate Institute of Biomedical Sciences, College of Medicine, Chang Gung University, Taoyuan, Taiwan

Yuan-Ming Yeh

Abteilung für Parasitologie, College of Medicine, Chang Gung University, Dist. Guishan, Stadt Taoyuan, Taiwan

Seow-Chin Ong, Rose Lin, Fu-Man Ku und Petrus Tang

Forschungszentrum für molekulare Infektionskrankheiten, Chang Gung Memorial Hospital, Linkou, Taiwan

Cheng-Hsun Chiu & Peter Tang

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WHC hat die Experimente entworfen; CCL, PJH und YMY führten die bioinformatischen Arbeiten durch; WHC, RL und FMK führten die Experimente durch; WHC hat das Manuskript geschrieben; MLC, CHC und PT haben das Manuskript überarbeitet. Alle Autoren haben das endgültige Manuskript gelesen und genehmigt.

Korrespondenz mit Petrus Tang.

Unzutreffend.

Die Autoren erklären, dass sie keine konkurrierenden Interessen haben.

Springer Nature bleibt neutral hinsichtlich der Zuständigkeitsansprüche in veröffentlichten Karten und institutionellen Zugehörigkeiten.

: Die Liste der annotierten Verbindungen, die in der Metabolomics-Analyse identifiziert wurden.

: Die relative Menge der in der Metabolomics-Analyse identifizierten Phospholipid-Derivate. Die relativen Werte der identifizierten Phospholipidderivate werden als fache Änderung von ID-Zellen (grauer Balken) zu IR-Zellen (schwarzer Balken) (ID/IR) angezeigt. Die Signifikanz wird durch Sternchen angezeigt: *P < 0,05; **P < 0,01; ***P < 0,001. IR, eisenreich; Ausweis, Eisenmangel.

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Nachdrucke und Genehmigungen

Cheng, WH., Huang, PJ., Lee, CC. et al. Die Metabolomik-Analyse zeigt Veränderungen im Zusammenhang mit der Bildung von Pseudozysten, die durch Eisenmangel bei Trichomonas vaginalis hervorgerufen werden. Parasites Vectors 16, 226 (2023). https://doi.org/10.1186/s13071-023-05842-w

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Eingegangen: 13. März 2023

Angenommen: 18. Juni 2023

Veröffentlicht: 06. Juli 2023

DOI: https://doi.org/10.1186/s13071-023-05842-w

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